脂溶性維生素由長(cháng)的碳氫鏈或稠環(huán)組成的聚戊二烯化合物。脂溶性維生素包括維生素A、D、E和K,它們都含有環(huán)結構和長(cháng)的、脂肪族烴鏈,這四種維生素盡管每一種都至少有一個(gè)極性基團,但都高度疏水的。某些脂溶性維生素并不是輔酶的前體,而且不用進(jìn)行化學(xué)修飾就可被生物體利用。
脂溶性維生素的樣品前處理過(guò)程分為溶解、皂化、萃取、水洗、脫水和濃縮6個(gè)步驟。
在進(jìn)行脂溶性維生素樣品試驗的時(shí)候,可能會(huì )遇到哪些問(wèn)題
問(wèn)題一試樣處理過(guò)程中,試樣不溶解于水,或溶解不均勻。
應采取均勻取樣:對于脂肪含量高的樣品,可適當減少取樣量,防止樣品因皂化不*而出現氮吹后殘留油狀物質(zhì)的情況。對于含淀粉的樣品,應先酶解再進(jìn)行皂化。對于不溶于水或溶解不均勻的樣品,可先振蕩再進(jìn)行超聲溶解。
問(wèn)題二萃取及水洗過(guò)程中,出現乳化現象。
應避免大力振搖分液漏斗,以防出現乳化現象而對實(shí)驗結果造成影響。若出現乳化現象,可加入少量飽和食鹽水,并靜置直至分層。
問(wèn)題三無(wú)法氮吹干,或氮吹后底部殘留油狀物質(zhì)。
確保漏斗及雞心瓶干燥。脫水過(guò)程中,應防止漏斗外壁的水流入雞心瓶中,以免出現氮吹不干的現象。氮吹干后,應根據樣品含量確定定容體積。
問(wèn)題四實(shí)驗過(guò)程中未考慮脂溶性維生素遇光、遇氧、遇熱不穩定的性質(zhì),造成脂溶性維生素的損失。
實(shí)驗全程應避光操作:皂化前需加入抗壞血酸,并充氮氣進(jìn)行保護。皂化完成后應立即冷卻至室溫,萃取完成后應在40±2℃的條件下旋蒸至近干,但決不允許旋蒸干。維生素A、D、E、K1的標準儲備液-10℃以下避光保存且使用前需校正濃度,標準工作液需臨用前配置。